基金项目: 国家自然科学基金(编号：81760273、81360103);;云南省科技计划项目(编号：2017FB107);;云南省“万人计划”青年拔尖人才专项；云南省卫生科技计划项目(编号：2018NS0112);;昆明医科大学研究生创新基金项目(编号：2019S119)
作者：李晓娟;王珏;何建萍;吕梦欣;钱源;
关键词：HOTAIR;;慢病毒载体;;HTR-8/Svneo;;子痫前期
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.05.003
〔摘 要〕 目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系，并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列，并将其克隆入LV5载体中，构建LV5-HOTAIR载体，重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后，转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒，制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞，采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系，荧光显微镜观察绿色荧光表达；qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符，过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达；qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞，且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。