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miR-381靶向TMEM16A对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

安徽医科大学学报 2020 12 v.55 1866-1871     字体:

基金项目: 湖北省卫生厅青年科技人才项目(编号:QJX2015-32)

作者:柯超;蒋斌;周红见;李全富;

关键词:miR-381;;调控跨膜蛋白16A;;胃癌;;增殖;;侵袭

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.12.010

〔摘 要〕 目的探究miR-381靶向调控跨膜蛋白16A(TMEM16A)对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法选取行手术切除的胃癌患者34例,采集其癌组织及癌旁正常组织(距癌组织<3 cm);正常培养胃癌细胞AGS、MKN45、SGC7901和正常人胃黏膜细胞GES-1,qRT-PCR检测组织和细胞中miR-381的表达;将miR-381-mimics、TMEM16A-siRNA转染AGS细胞,另设置空白对照组,检测细胞中miR-381和TMEM16A mRNA的表达;应用在线生物信息学预测软件和双荧光素酶实验分析miR-381和TMEM16A的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot检测细胞中p27基因、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3、caspase-9)、E钙黏素、波形蛋白、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的表达。结果与正常组织和正常胃黏膜细胞相比,胃癌组织和细胞中miR-381表达降低(P<0.05),而TMEM16A mRNA表达升高(P<0.05);与空白对照组相比, miR-381-mimics组miR-381表达上升,TMEM16A mRNA表达下降(P<0.05),TMEM16A-siRNA组TMEM16A mRNA表达下降(P<0.05),联合转染组miR-381表达上升(P<0.05),但与miR-381-mimics组比较差异无统计学意义(P>0.05),TMEM16A mRNA表达下降(P<0.05),且低于miR-381-mimics组、TMEM16A-siRNA组(P<0.05);与空白对照组相比,miR-381-mimics组、TMEM16A-siRNA组及联合组细胞增殖明显抑制,细胞凋亡率、p27、caspase-3、caspase-9、E-cadherin的表达增加,细胞侵袭数、Vimentin、MMP-2及MMP-9的表达下降(P<0.05)。结论miR-381可负向调控TMEM16A抑制胃癌细胞AGS的增殖和侵袭,并促进其凋亡。