基金项目: 国家自然科学基金(编号:81202541、81973332、81973314);;安徽省自然科学基金杰出青年基金(编号:1808085J28);;安徽高校自然科学研究重点项目(编号:KJ2017A176);;安徽省高校优秀青年人才支持计划项目(编号:gxyqZD2017025);;安徽省留学回国人员创新创业扶持计划(2017);;安徽医科大学青年拔尖人才支持计划(2013);;第三批安徽医科大学校级中青年学术技术带头人基金
作者：陶娟;周伟杰;邰宇;郭派派;周正炜;王珍;汪庆童;魏伟;
关键词：G蛋白偶联受体激酶2;;CRISPR/Cas9;;基因工程小鼠;;基因型鉴定
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.07.010
〔摘 要〕 目的应用CRISPR/Cas9技术构建G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)杂合敲除(GRK2~(+/-))小鼠,用于疾病病理机制及药物靶点研究。方法构建靶向敲除GRK2基因的载体,在体外将先导RNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,在小鼠GRK2基因的第3个外显子上造成基因突变,通过PCR及基因测序测定F0代基因型,成功获得13bp和19bp敲除两种GRK2~(+/-)小鼠。因GRK2纯合子敲除胚胎期死亡,将19bp敲除F0代小鼠与C57BL/6小鼠回交,获得稳定的19bp敲除F1代GRK2~(+/-)小鼠用于扩繁及实验。结果 GRK2~(+/-)小鼠基因型稳定,体重较同龄C57BL/6小鼠低,Western blot检测证实GRK2~(+/-)小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏、巨噬细胞及肾脏组织中GRK2蛋白的表达均显著降低。结论该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了GRK2~(+/-)小鼠模型,为进一步研究GRK2在多种脏器、细胞发育中的作用,疾病发病机制及药物作用靶点提供了重要的动物模型。