安徽医科大学学报
2020 05 v.55 800-803
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81673242、81973983);;安徽高校自然科学研究项目(编号:KJ2018A0193);;安徽省高校优秀青年人才支撑计划(编号:gxyq2018010)
作者：苏丛;徐方明;伍婷;张鹏飞;陈昊然;刘艳艳;兰燕虎;李家斌;律娜;
关键词：CRISPR-Cas9技术;;gpr41;;巨噬细胞;;基因敲除
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.05.029
〔摘 要〕 采用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建G-蛋白偶联受体41(gpr41)基因敲除的RAW264.7细胞系。利用慢病毒转染,构建稳定表达Cas9蛋白的巨噬细胞株。针对gpr41基因作用的功能区域,设计靶向gpr41基因的向导RNA(gRNA),构建pLenticrisprV2重组质粒转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子测序验证gRNA的有效性。鉴定成功的pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒采用转染试剂转染巨噬细胞系RAW264.7。筛选阳性单克隆细胞株,Western blot检测gpr41基因的表达。测序结果证实pLenticrisprV2-gpr41-gRNA重组质粒构建成功;Western blot筛选出重组质粒pLenticrisprV2-gpr41-gRNA3转染RAW264.7细胞13号单克隆株的GPR41蛋白不表达。利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建了gpr41基因敲除的巨噬细胞株,为研究gpr41基因在RAW264.7细胞中的作用机制奠定基础。