安徽医科大学学报
2020 01 v.55 46-50
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基金项目: 广东省自然科学基金(编号:2016A030313677);;广东医科大学博士学位人员和人才引进人员科研启动项目(编号:B2017002);;湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目(编号:2019A01010)
作者：符伟玉;林小聪;陈小谊;余华军;兰柳波;
关键词：胃癌;;长链非编码RNA;;慢病毒;;增殖
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.01.010
〔摘 要〕 目的构建长链非编码RNA (lncRNA) BC002811慢病毒表达载体,并探讨稳定表达BC002811对胃癌HGC-27细胞增殖的影响。方法将PCR法扩增得到的BC002811全基因序列,与pLVX-EGFP-IRES-neo载体连接,经酶切鉴定和测序验证后,与辅助包装质粒共转染HEK293T细胞,包装成重组慢病毒颗粒,再感染HGC-27细胞,经有限稀释法筛选出稳定表达BC002811的细胞克隆并扩大培养。qPCR法分析BC002811的表达水平,MTS法检测细胞增殖能力。结果双酶切和测序结果表明BC002811重组慢病毒载体构建成功,经HEK293T细胞包装后,测定其病毒滴度为2.2×10~(11) TU/L。将此病毒感染HGC-27细胞,显示可有效提高BC002811的表达水平(P<0.05)。MTS法检测结果显示,与对照组相比,BC002811组的HGC-27细胞增殖能力增强(P<0.05)。结论成功构建了BC002811重组慢病毒载体,该载体能稳定感染HGC-27细胞,使BC002811过表达并提高细胞的增殖能力。