基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:1308085QH152);;安徽医科大学校科研基金联合资助项目(编号:2015xkj111、2018xkj038);;安徽省高等学校省级质量工程项目(编号:2014jyxm110)
作者:郑璐;汤铜;杜旺;贾文俊;张磊;钱波;李佳;黄赞;丁一博;
关键词:RASSF1A基因;;乳腺癌;;MCF-7;;增殖凋亡
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.06.010
〔摘 要〕 目的通过脂质体介导细胞转染,构建Ras相关区域家族1(RASSF1A)基因过表达的乳腺癌MCF-7细胞株,研究RASSF1A基因对乳腺癌MCF-7细胞株增殖、克隆形成、凋亡的作用。方法构建RASSF1A过表达载体并鉴定,通过脂质体介导细胞转染将空载体及含有目的基因的重组载体转染到乳腺癌MCF-7细胞株中。分别通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western Blot观察转染效率及确定最优转染条件。并通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)、平板克隆、流式细胞术分别检测RASSF1A重组基因转染组、空载体转染组及空白细胞对照组细胞增殖、细胞克隆形成以及细胞凋亡的情况。结果转染RASSF1A基因后的乳腺癌MCF-7细胞株出现该基因mRNA及蛋白质水平显著提升,证明RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株构建成功。MTT、平板克隆及流式细胞术检测结果显示:与对照组相比,RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株增殖、克隆形成能力受到抑制,而细胞凋亡率增加。结论成功构建了RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株,RASSF1A基因可能参与了乳腺癌MCF-7细胞株增殖、凋亡的调控,其机制可能与抑制BC细胞增殖、促进凋亡有关。