基金项目: 国家自然科学基金(编号:81171606);; 安徽省临床检测技术公共服务平台(编号:PT20081011)
作者:张焰;王晓玮;程筱雯;徐元宏;
关键词:早期分泌靶向抗原6;;γ-干扰素;;基因芯片;;信号通路;;结核
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.12.003
〔摘 要〕 目的利用全基因组表达谱芯片对早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)刺激结核患者外周血CD4~+T淋巴细胞前后释放γ-干扰素(IFN-γ)mRNA进行检测,并对mRNA在刺激过程中可能涉及到的信号通路变化进行分析。方法抽取3例初诊结核患者外周静脉血各10 ml,密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(PBMC),ESAT-6刺激PBMC,6 h后磁珠法分选CD4~+T淋巴细胞,提取细胞总RNA,全基因组表达谱芯片检测刺激前后差异表达基因。利用GO分析对差异表达的基因进行功能分类,KEGG进行信号通路分析。结果 ESAT-6刺激后差异表达的mRNA共有2 297条,相对高表达的mRNA有1 071条,相对低表达的mRNA有1 226条(>2倍变化且P<0.05)。信号通路分析显示差异表达的mRNA参与了17条信号通路的调控,其中JAK-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等5条信号通路与结核释放IFN-γ关系密切。结论 ESAT-6刺激后的CD4~+T淋巴细胞有大量mRNA发生差异表达,其在多个与结核释放IFN-γ密切相关的信号通路中发挥着重要的调控作用。