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glipr1基因的原核表达及多克隆抗体制备

安徽医科大学学报 2016 10 v.51 1436-1439+1444     字体:

基金项目: 江苏大学高级专业人才科研启动基金(编号:11JDG063);;国家博士后科学基金(编号:2015M571702)

作者:生秀梅;陈龙;王正新;

关键词:GLIPR1;;蛋白表达;;多克隆抗体

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.009

〔摘 要〕 目的克隆表达胶质瘤致病相关蛋白1基因(glipr1)并制备多克隆抗体,运用该抗体检测各肿瘤细胞系中GLIPR1的表达。方法通过PCR技术以含glipr1基因的c DNA克隆质粒(p LX304-glipr1)为模板获得glipr1(M)片段,再将此片段克隆至表达载体p ET-15b上,并转入大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)进行表达;Ni柱纯化后的GLIPR1(M)蛋白作为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体,Western blot法检测其特异性,并检测GLIPR1在A549、PC14、LNCa P、PC3及U87细胞中的表达。结果成功构建了表达载体p ET-15bglipr1(M),并获得了纯化的GLIPR1(M)蛋白,成功制备了兔抗GLIPR1多克隆抗体,特异性高,可用于检测各细胞系中GLIPR1的表达,GLIPR1在U87中的表达最高。结论成功表达了GLIPR1(M)蛋白,并获得了多克隆抗体,为进一步研究GLIPR1的功能和作用机制奠定了基础。