基金项目: 国家自然科学基金(编号:30872253);;安徽省科技厅科技攻关项目(编号:08010302179);;校企合作实践教育基地(编号:2012sjjd014)
作者:伊兴旭;陈敬贤;甘霖;王明丽;
关键词:水痘-带状疱疹病毒;;原核表达;;融合蛋白;;兔抗血清
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.02.001
〔摘 要〕 目的采用原核表达系统表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)基因的胞外域,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,制备该蛋白特异性抗血清。方法构建原核表达质粒g E-p ET-32a(+),测序后将其转化至E.coli BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得VZV g E融合蛋白。采用SDS-PAGE电泳、Western blot法鉴定其特异性,利用Ni2+-NTA柱对g E蛋白进行纯化,复性后免疫新西兰家兔,获得兔抗VZV g E血清;采用间接免疫荧光、Western blot法和ELISA法检测该血清的特异性和效价。结果成功诱导表达出VZV g E融合蛋白,SDS-PAGE鉴定提示其主要为包涵体表达,浓度约为3.01 mg/ml。蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,纯度约为90%。Western blot法显示,经变性、复性后的该融合蛋白有良好的免疫反应性。用该蛋白免疫新西兰家兔后获得兔抗VZV g E血清。ELISA分析显示,该兔抗血清的效价为1∶6 400。结论成功构建了高效表达VZV g E蛋白的原核表达系统,获得较高纯度的g E蛋白,可以作为VZV亚单位疫苗的候选抗原,制备了特异性及效价均较高的兔抗VZV g E多克隆抗体,为VZV感染的临床诊断及治疗提供了重要的实验工具。