基金项目: 宁夏自然科学基金(编号:NZ11128)
作者:马会明;张永芳;王蒙蒙;李昀伽;蒲静;于佳;王燕蓉;裴秀英;徐仙;
关键词:GDF9 siRNA;;细胞增殖;;细胞周期;;卵巢颗粒细胞;;小鼠
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.01.012
〔摘 要〕 目的探讨生长分化因子-9(GDF9)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力基因周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶抑制因子27(p27kip1)表达的影响。方法利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;使用流式细胞术、Real-time PCR和Western blot法验证GDF9 siRNA的干扰效率;采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞增殖cyclin A、cyclin D1和p27kip1 mRNA和蛋白表达情况。结果 GDF9 siRNA显著抑制颗粒细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P<0.05);Real-time PCR和Western blot法检测结果显示GDF9 siRNA显著下调小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9 mRNA及蛋白的表达(P<0.01);Realtime PCR法检测结果显示,细胞cyclin A、cyclin D1 mRNA表达降低,p27kip1 mRNA表达增强;Western blot法结果显示,GDF9 siRNA可促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1的表达,同时下调G2/M期调控蛋白cyclin A、cyclin D1的表达。结论靶向抑制小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9的表达,下调细胞cyclin A、cyclin D1的表达,上调P27 kip1的表达,显著抑制细胞的增殖。