基金项目: 安徽高校省级自然科学研究项目(编号:KJ2014A113)
作者:金玮;吴萍;
关键词:胃癌;;细胞凋亡;;小干扰RNA;;Mcl-1
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.01.011
〔摘 要〕 目的探讨转染髓样细胞白血病(Mcl-1)siRNA特异性沉默Mcl-1基因对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导胃癌细胞HGC-27凋亡的影响。方法采用碘化丙啶(PI)染色法流式细胞术分析TRAIL单独作用的细胞凋亡率以及广谱caspase抑制剂z-VAD-fmk对细胞凋亡的抑制作用;Western blot法分析TRAIL处理前后半胱天冬酶-3(caspase-3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活化以及抗凋亡的Bcl-2、Bcl-X_L及Mcl-1的蛋白表达情况;采用Lipofectamine 2000转染Mcl-1 siRNA入HGC-27细胞,Western blot法验证基因沉默效果,流式细胞术分析转染后细胞凋亡率的变化。结果 HGC-27细胞对TRAIL不敏感,48 h的凋亡率仅为(20.65±3.23)%,z-VAD-fmk能几乎完全阻止TRAIL诱导的凋亡;TRAIL作用晚期caspase-3活化、PARP-1裂解,Bcl-2、Bcl-X_L及Mcl-1在TRAIL处理前后没有明显的变化;Mcl-1 siRNA转染后能显著降低细胞中Mcl-1的蛋白表达水平,且细胞转染Mcl-1 siRNA后再加入TRAIL处理,细胞凋亡率明显增加。结论 Mcl-1的高表达可能与HGC-27细胞对TRAIL抵抗有关,Mcl-1 siRNA沉默Mcl-1基因能增加HGC-27细胞对TRAIL的敏感性。