〔摘　要〕 目的运用基因克隆技术构建人源β1,4-半乳糖转移酶Ⅱ(β4Gal TⅡ)真核表达质粒,并将其转染到COS7细胞中,观察蛋白在细胞内的定位,同时转染到HEK 293T细胞中检测其表达。方法分别设计带FLAG标签和GFP标签的β4Gal TⅡ基因的特异性引物,以含人β4Gal TⅡ全长c DNA序列为模板,定向构建到pc DNA3.1(+)及p CDGFP真核表达载体中,构建重组表达质粒。通过酶切和测序鉴定阳性重组质粒,利用Lipofectamine 2000分别转染COS7、HEK 293T细胞,免疫荧光显微镜观察重组蛋白在细胞内的定位,Western blot法鉴定重组蛋白的表达。结果成功构建pc DNA3.1-β4Gal TⅡ-FLAG和p CDGFP-β4Gal TⅡ重组表达载体,定位实验表明:β4Gal TⅡ-FLAG和GFP-β4Gal TⅡ二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围,并有明显的块状染色,胞核中未见明显分布;Western blot法检测显示重组β4Gal TⅡ蛋白在HEK 293T细胞中稳定表达。结论获得了人β4Gal TⅡ的真核表达质粒,并能在COS7和HEK 293T细胞中表达,为进一步研究β4Gal TⅡ的功能及其与其他蛋白的相互作用奠定了一定基础。