基金项目: 安徽省科技厅重点课题(编号:10021303003)
作者:古月;王银龙;
关键词:牙周膜干细胞;;miR-210;;低氧诱导因子-1α;;血管内皮生长因子;;慢病毒载体
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.10.004
〔摘 要〕 目的构建miR-210的慢病毒载体(Lenti-miR-210-Luciferase),转染人牙周膜干细胞(h PDLSCs)后,检测成血管因子低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在h PDLSCs的表达。方法分离培养h PDLSCs,并根据人miR-210基因(NC_000011.9)序列行引物设计及序列片段的PCR扩增,将目的基因PCR产物连接到载体p LVX-EGFP-3FLAG-EF1-Luc上。将目的基因PCR产物和目的载体用EcoRⅠ和XbaⅠ分别进行酶切,对质粒进行鉴定。采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-miR-210-Luciferase(Lenti-Lac Z-Luciferase为对照组)。转染h PDLSCs后,通过q PCR和免疫组化法检测HIF-1α及VEGF的表达。结果通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实Lenti-miR-210-Luciferase构建成功。Lenti-miR-210-Luciferase转染h PDLSCs,0、1、4、7、14 d后行q PCR检测,结果表明第4天HIF-1α和VEGF明显过表达,且持续到第14天。免疫组化结果显示,miR-210转染h PDLSCs后,抗HIF-1α和抗VEGF染色呈阳性,对照组呈阴性。结论成功构建了慢病毒载体Lenti-miR-210-Luciferase,并且miR-210具有促进h PDLSCs血管向分化的作用。