安徽医科大学学报
2015 10 v.50 1377-1380
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基金项目: 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);;安徽省级大学生创新创业训练计划项目(编号:AH201410366017,AH201410366132)
作者：汪燕燕;潘林鑫;王梦媛;刘晓颖;范礼斌;
关键词：E2F1;;转染;;基因表达;;细胞定位
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.10.003
〔摘 要〕 目的研究人E2F1蛋白在真核细胞内的表达及其与Sedlin蛋白的共定位。方法构建pc DNA3.1-E2F1-FLAG真核表达质粒,然后瞬时转染至HEK 293T细胞内,Western blot法检测E2F1蛋白的表达;瞬时单转E2F1-FLAG和共转E2F1-FLAG+Sedlin-绿色荧光蛋白(GFP)至非洲绿猴肾细胞(COS7)内,免疫荧光制片,荧光显微镜下观察E2F1-FLAG在细胞内的定位及其和Sedlin的共定位。结果真核表达质粒pc DNA3.1-E2F1-FLAG构建成功,且在HEK 293T细胞中能够成功表达,在COS7细胞中主要定位在细胞核,且与Sedlin共定位于细胞核。结论人E2F1在HEK 293T、COS7细胞中都能够正常表达,且与Sedlin蛋白存在共定位现象,为进一步了解人E2F1的功能及其蛋白质相互作用提供了一定的细胞学基础。