基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:31160199)
作者:宁寅宽;李强;蔡伟良;武成聪;陈佳滨;石正松;
关键词:重组腺病毒;;绿色荧光蛋白;;骨髓间充质干细胞;;脱钙骨基质;;能谱分析
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2015.02.009
〔摘 要〕 目的用绿色荧光蛋白(GFP)标记结合扫描电镜和X射线能谱分析(SEM/EDS)技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨(DBM)支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d时,细胞内GFP有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比(Ca/P)为1.46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。