基金项目: 国家自然科学基金(编号:32000017、31660012);贵州省科技计划项目[编号:黔科合基础-ZK(2021)重点030];
作者:刘翔,杨碧,田询,周建鸿,廖永慧,刘玲玲,禹文峰,齐晓岚,江银辉
关键词:黄曲霉;RNAi;应激反应;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.09.003
〔摘 要〕 目的 探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法 利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种106CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基上观察突变菌株的生长发育现象。在小量酵母提取物葡萄糖(YGM)培养基中加入200、400μg细胞壁压力试剂刚果红(CR),0.8 mol/L、1.6 mol/L渗透压药物氯化钠(NaCl),氧化压力试剂2 mmol/L、4 mmol/L过氧化氢(H2O2),基因组损伤剂0.01%、0.02%甲磺酸甲酯(MMS)试剂分析突变菌株的压力应激反应。结果 成功构建黄曲霉突变菌株ΔAgo1、ΔAgo2、ΔRDRP1、ΔRDRP3且生长发育正常。ΔAgo1、ΔAgo2菌株相比对照可降低对细胞壁和渗透压的胁迫影响。Ago1基因缺失可降低H2O2的影响,相反RDRP3基因缺失,H2O2的抑制作用增加。ΔAgo2、ΔRDRP1菌株能降低对基因损伤剂的作用。此外,ΔRDRP1增加渗透压胁迫作用。结论 黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因不参与生长速率和无性繁殖调控,可以参与调节宿主菌对环境的应激反应。