安徽医科大学学报
2014 11 v.49 1531-1534
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基金项目: 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);;安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164);;安徽医科大学博士科研资助项目(编号:XJ201009)
作者：李克娟;顾彧;刘晓颖;范礼斌;
关键词：AK3;;细胞定位;;免疫荧光
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.11.002
〔摘 要〕 目的运用基因克隆技术构建带FLAG标签的腺苷酸激酶3(AK3)真核表达载体,观察其在哺乳动物细胞内的定位和表达情况。方法以人AK3全长的cDNA序列的菌液为模板,设计带有FLAG标签的引物,用PCR方法构建出真核表达载体pcDNA3.1-AK3-FLAG。运用免疫荧光及Western blot法检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达情况。结果成功构建了pcDNA3.1-AK3-FLAG质粒;荧光定位试验表明AK3在COS7细胞的胞质中呈斑点状分布,细胞核中未见明显分布;Western blot法检测表明AK3在HEK-293T细胞中能有效表达。结论 AK3在哺乳动物细胞内能够有效表达和定位,为进一步研究AK3和其他蛋白之间的相互作用奠定了基础。