安徽医科大学学报
2014 09 v.49 1193-1197
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基金项目: 国家自然科学基金(编号81273526、81202978);;新教师博士点基金(编号:20123420120001)
作者：彭云云;黄成;马陶陶;徐涛;李琳;陈晨;李俊;
关键词：MeCP2;;COS-7;;基因表达
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.09.002
〔摘 要〕 目的构建人类甲基化CpG结合蛋白(MeCP2)基因的真核表达载体pEGFP-C2-MeCP2,在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7)中检测其表达及定位。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得cDNA,以其为模板扩增MeCP2全长编码基因,克隆到载体pEGFP-C2上。构建的重组质粒测序后转染至COS-7细胞中,荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,检测MeCP2蛋白定位,Western blot法和RT-PCR法鉴定MeCP2蛋白和基因表达。结果成功构建pEGFP-C2-MeCP2重组质粒,酶切鉴定片段为1 461 bp。MeCP2蛋白及基因表达水平明显增加。细胞定位实验结果显示MeCP2蛋白定位于胞核。结论成功构建重组质粒pEGFP-C2-MeCP2,该质粒的构建为进行MeCP2功能研究提供了依据。