安徽医科大学学报
2014 09 v.49 1189-1192
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基金项目: 国家自然科学基金青年基金(编号:81201368);;安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164);;安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187)
作者：乔正;赵健;潘林鑫;李春雨;徐雪琴;刘晓颖;范礼斌;
关键词：RACK1;;基因表达;;细胞定位;;BL21
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.09.001
〔摘 要〕 目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达,Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。