安徽医科大学学报
2014 06 v.49 833-836
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基金项目: 国家高技术研究发展计划“863计划”(编号:2012AA022003);;“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项“十二五”实施计划(编号:2013ZX10004-605、2013ZX10004-217、2013ZX10004-607、2011ZX10004-001);;“重大新药创制”科技重大专项“十二五”实施计划(编号:2011ZX09401-023);;国家自然科学基金(编号:81072350);;病原微生物生物安全国家重点实验室开放课题(编号:SKLPBS1113)
作者：滑玉会;黄勇;张志毅;安小平;米志强;尹秀云;陈建魁;童贻刚;
关键词：CRISPR系统;;大肠埃希菌;;噬菌体;;噬菌体耐受
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.06.032
〔摘 要〕 人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌;利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌E.coli 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用E.coli 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为E.coli 147-30R1。