〔摘　要〕 目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者脂肪细胞因子瘦素、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、脂联素与炎症细胞因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系。制备人RBP4分子RNAi载体及真核表达载体并检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响。方法①选择GDM孕妇60例,正常糖耐量孕妇(NGT)44例,采用ELISA法检测两组孕妇血清中脂联素和RBP4水平,放射免疫法检测两组孕妇空腹胰岛素(FIns)、瘦素、IL-6、TNF-α的水平,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI),酶法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),比色法测定游离脂肪酸(FFA)水平,计算晚孕期体重指数(BMI),并进行Pearson相关分析。②分别构建针对RBP4基因表达框5'端和3'端的干涉载体pSilencerTM4.1-RBP4-5',pSilencerTM4.1-RBP4-3'及pSecTag-RBP4真核表达载体,经测序和酶切鉴定后将干涉载体转染人LO2细胞株,RT-PCR和Western blot法确定其干涉RBP4表达的效率,选择干涉较高的载体用于后续实验。③将LO2细胞分为未转染的空白对照组、阴性对照组、转染pSecTag-RBP4质粒的RBP4高表达组和转染pSilencerTM4.1-RBP4的RBP4低表达组,Western blot检测ERK1/2的表达及磷酸化水平的改变,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残留量。结果①与NGT组孕妇比较,GDM组孕妇的空腹血糖、血脂、FFA、瘦素、IL-6、TNF-α、RBP4均明显升高,脂联素水平明显下降,存在显著的炎性激活及胰岛素抵抗;HOMA-IR、RBP4、瘦素与IL-6、TNF-α呈正相关,ISI、脂联素与IL-6、TNF-α呈负相关。②构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序鉴定结果正确,并有明显的高表达或干涉效果,选择pSilencerTM4.1-RBP4-5'进行干涉实验。③经Western blot分析,与空白对照组相比,各组蛋白ERK1/2的表达量均无明显变化;pSecTag-RBP4高表达组的ERK1/2的磷酸化显著下降,pSilencerTM4.1-RBP4-5'干涉组的ERK1/2的磷酸化显著上升。胰岛素刺激后pSecTag-RBP4高表达组的葡萄糖摄取明显下降,pSilencerTM4.1-RBP4-5'组的葡萄糖摄取明显增加。结论①GDM患者的炎性激活与过度分泌的脂肪细胞因子之间存在明显的正相关,可能是GDM中胰岛素抵抗发生发展的机制之一。②成功制备RBP4基因的干涉载体和应用于LO2细胞中ERK1/2的研究,为后续RBP4对MAPK信号通路的进一步研究奠定基础。