安徽医科大学学报
2012 11 v.47 1278-1282
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基金项目: 安徽省高等学校省级优秀青年人才基金重点项目(编号:2011SQRL064ZD);; 安徽医科大学校基金(编号:2010xkj015)
作者：储著朗;崔笑;杨晓明;汪思应;
关键词：肝细胞生成素205;;COX6B1;;蛋白质相互作用
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.11.003
〔摘 要〕 目的以酵母双杂交(Y2H)和GST融合蛋白沉降技术(GST-Pull down)来探讨肝细胞生成素205(HPO205)与细胞色素C氧化酶(COX)6B1间存在的相互作用,为研究HPO205的功能提供依据。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增HPO205和COX6B1的编码基因,分别构建至pDBLeu和pPC86的重组Y2H质粒载体。然后将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行Y2H鉴定,并用GST-Pull down技术对其验证。结果成功克隆HPO205和COX6B1编码基因至Y2H载体和相应表达载体。经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER和pPC86-COX6B1共转后能激活Ura、LacZ、His 3个报告基因;GST-Pull down实验显示,GST-COX6B1能沉淀HPO205。结论 HPO205可能通过与COX6B1相互作用影响线粒体氧化磷酸化过程。