翟金霞;叶冬青;
摘要:
目的研究吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)处理的雌性MRL/lpr小鼠肾脏中细胞增殖、凋亡、炎性细胞浸润以及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)等分子表达的影响,初步探讨PDTC拮抗LPS诱导的狼疮倾向小鼠肾脏损伤的可能作用机制。方法选择6周龄近交系MRL/lpr雌鼠28只,随机分为LPS组(按每20 g体重给予0.1 ml LPS溶液,给药剂量约1.0mg/kg体重)、LPS+PDTC组[按每20 g体重先给予0.1 ml PDTC(60 mg/kg体重),0.5 h后给予0.1 mlLPS溶液(1.0 mg/kg体重)]、PDTC组[按每20 g体重先给予0.1 ml PDTC(60 mg/kg体重)]和对照组(按每20 g体重给予0.1 ml生理盐水溶液),每组7只。采用腹腔染毒方法,每周2次,共染毒14周。所有动物在染毒14周后处死,取左侧肾脏置于10%福尔马林固定、制作石蜡切片,切4μm切片进行HE、PAS和Masson染色。在右肾切取约1 mm3肾皮质置于2.5%戊二醛固定,用于制备透射电镜切片,于电镜下观察肾小球沉积物及基底膜的改变。用ELISA方法检测血清抗双链DNA(ds-DNA)、MCP-1和TGF-β1表达水平。用Western blot的方法检测LPS和PDTC对MAPK信号通路相关蛋白pp38、p38、胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的胞外信号调节激酶(pERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(pJNK)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、核因子-κB(NF-κB)等表达的影响。用TUNEL染色检测PDTC对LPS染毒小鼠肾脏细胞凋亡的影响。用免疫组化法检测MCP-1和TGF-β1在MRL/lpr小鼠肾脏组织中的表达情况。结果动物实验结果显示,LPS染毒14周后,20周龄的雌性MRL/lpr小鼠的体重差异无统计学意义。与PDTC组小鼠相比,LPS组血清抗ds-DNA、MCP-1水平增高,TGF-β1水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,PDTC干预组血清抗ds-DNA、MCP-1和TGF-β1水平差异无统计学意义;与对照组相比,LPS组小鼠肾脏的NF-κB、pERK、pJNK、MCP-1、Bax、Bcl-2、Caspase 3和Caspase 9蛋白水平明显上升;pp38和TGF-β1蛋白水平明显下降;PDTC干预组小鼠肾脏NF-κB、pJNK、MCP-1和Caspase 3蛋白水平低于LPS组(P<0.05);LPS组小鼠肾脏pp38、TGF-β1和Caspase 9蛋白表达水平下降(P<0.05);PDTC干预后上调pp38、TGF-β1和Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。LPS组小鼠肾脏病理切片HE染色结果显示,肾脏系膜细胞出现明显增生和严重的炎性细胞浸润,个别小鼠的肾脏出现明显的系膜细胞坏死或肾脏坏死;PAS染色结果显示:肾小球分叶明显,系膜细胞增生明显,基底膜弥漫性增厚,系膜区及基质细胞增加;Masson染色结果显示:肾小球和间质均出现明显的纤维化和炎症浸润,系膜细胞及基质增多;电镜下可见肾小球脏层上皮细胞(足细胞)的骨架改变、融合,足突消失,伴随明显的基底膜下电子致密物沉积。而PDTC可以明显的改善LPS所致的肾脏损害;PDTC干预组的肾脏损害较PDTC组和对照组明显。结论 PDTC通过抑制NF-κB、pJNK和MCP-1表达来抑制炎性细胞浸润等机制来改善LPS所致的肾脏损害。PDTC改善LPS诱导的MRL/lpr小鼠肾脏损害的作用机制与调节NF-κB、MAPK信号通路相关蛋白以及凋亡相关蛋白的表达有关,可能通过NF-κB-MAPK信号通路发挥作用。
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