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抗氧化转录因子Nrf2与Rad51相互作用降低BLM对细胞DNA的损伤

安徽医科大学学报 2022 11 v.57 1769-1774     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:11805228)

作者:徐倩倩;张沛誉;陈妮;

关键词:Nrf2;;Rad51;;DNA损伤修复;;博莱霉素

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.11.015

〔摘 要〕 目的 探究核因子E2相关因子2(Nrf2)在博莱霉素(BLM)诱导肺癌细胞DNA损伤中的作用机制。方法用活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测人肺癌细胞A549和H1299细胞内组织ROS的荧光强度。用Western blot及微核检测A549和H1299细胞在5μg/ml BLM处理后细胞DNA损伤情况。接着分别构建Nrf2低表达瞬转siRNA及稳转细胞系shRNA的肺癌细胞来检测在BLM作用后Nrf2低表达的细胞DNA损伤情况。细胞内Nrf2和Rad51蛋白相互作用采用免疫共沉淀方法进行检测。结果研究显示,在BLM作用下,A549和H1299细胞内的ROS水平上升(P<0.01),且出现Nrf2进入细胞核发生活化的现象。在BLM作用下,白藜芦醇(Res)刺激A549和H1299细胞能使Nrf2的蛋白表达水平上调(P<0.01),然而DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的表达却下降(P<0.01)。相反,用siRNA干扰细胞内Nrf2的表达后,在BLM作用下A549和H1299细胞的γ-H2AX蛋白表达上调(P<0.01)。Western blot结果显示同源重组修复蛋白Rad51的表达与Nrf2低表达的A549细胞中Nrf2蛋白的表达出现同步下调(P<0.01)。结论肿瘤细胞内抗氧化转录因子Nrf2可与Rad51相互作用调控Rad51的表达,降低BLM诱导的细胞DNA的损伤。