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日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定

安徽医科大学学报 2011 11 v.46 1109-1113     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:30771882)

作者:赵前峰;陈红霞;任翠平;刘淼;沈际佳;

关键词:日本血吸虫;;Nanos样蛋白;;原核表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.11.001

〔摘 要〕 目的获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定。结果该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性。结论获得日本血吸虫Nanos蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。