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表达荧光素酶报告基因稳定细胞系的建立及对CBLB502活性的检测

安徽医科大学学报 2011 04 v.46 310-313     字体:

基金项目:

作者:汤立宣;王治东;许望翔;葛常辉;杨晓明;

关键词:荧光素酶类;;NF-κB;;潮霉素B

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.04.003

〔摘 要〕 目的建立表达NF-κB-RE-luc2P荧光素酶报告基因的稳定细胞系以检测CBLB502的活性。方法利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有NF-κB报告基因的质粒NF-κB-RE-luc2P转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),并通过潮霉素B进行克隆筛选,最后挑取单克隆进行放大并应用荧光素酶检测方法进行鉴定。结果经200μg/ml的潮霉素B筛选,得到所需要的单克隆株,鉴定并保存。应用该潮霉素抗性单克隆细胞系对基于NF-κB信号通路的新型抗辐射蛋白药物CBLB502活性的检测显示出良好的量效关系。结论本实验通过Lipofectin2000转染法并在潮霉B筛选成功培育出稳定表达NF-κB报告基因活性的HEK293细胞系。