安徽医科大学学报
2011 02 v.46 112-115
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基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:090413117);; 安徽省高等学校省级自然科学研究项目(编号:KJ2010B375)
作者：王青元;朱靖;周颖;凌斌;
关键词：人乳头瘤病毒18;;原核细胞;;遗传载体;;基因表达
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.02.003
〔摘 要〕 目的构建pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段克隆到p3×flag-myc-CMV-24载体上。然后设计特异性引物扩增3×flag-HPV18E6重组基因片段,将该片段连接到pET-22b原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达3×flag-HPV18E6融合蛋白,经Western blot鉴定。结果 pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体构建正确,IPTG诱导以浓度0.1 mmol/L,时间2 h为宜,表达的3×flag-HPV18E6融合蛋白相对分子质量约20 ku。结论成功构建pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体并诱导3×flag-HPV18E6融合蛋白表达。