基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:30872992)
作者:王超;秦宜德;王巍;顾芳;
关键词:启动区(遗传学);;遗传载体
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2009.05.001
〔摘 要〕 目的分析人MUC16基因的转录起始位点和重要的调控区域,确定人MUC16基因的核心启动子可能存在区域。方法用生物信息学分析人MUC16基因启动子所在区域。培养SKOV3细胞株并提取细胞基因组DNA,用PCR技术扩增启动子区域的594(-1 844/-1 250/)、548(-1 798/-1 250)、326(-1 576/-1 250)和170 bp(-1 420/-1 250)的启动子片段,分别构建重组PGEM-T质粒,再克隆入荧光素酶报告基因载体PGL3载体,构建PGL3-170、PGL3-326、PGL3-548和PGL3-594重组表达质粒。用脂质体介导的方法瞬时转染SKOV3细胞,测定荧光素酶的表达活性。结果成功构建4种人MUC16基因启动子片段的荧光素酶报告基因表达体系,分别为PGL3-170(-1 420/-1 250)、PGL3-326(-1 576/-1 250)、PGL3-548(-1 798/-1 250)和PGL3-594(-1 844/-1 250),各缺失片段在SK-OV3细胞中均有活性。MUC16的核心启动子5′端可能为PGL3-326的3′端,3′端固定在-1 250处,5′端由-1 844向-1420移动时启动子活性逐渐增强,且变化幅度较大,提示这一区间内可能存在重要的顺式作用元件。结论成功构建了人MUC16基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体,确定人MUC16基因的核心启动子区域。