安徽医科大学学报
2009 02 v.44 147-150
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基金项目: 国家自然科学创新群体基金资助项目(编号:30621063);; 国家高新技术研究发展计划(863计划)资助项目(编号:2006AA02A310);; 国家重点基础研究发展规划(973计划)资助项目(编号:2006CB910802);; 安徽省人才开发基金资助项目(编号:2002Z035)
作者：黄晓碧;王建;王晓辉;姚景辉;原艳芝;杨晓明;汪思应;
关键词：NF-κB;;基因;;转录;;肿瘤坏死因子-alpha
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2009.02.002
〔摘 要〕 目的构建人TRAF1真核表达载体,应用荧光素酶报告基因实验研究TRAF1对NF-κB报告基因活性的影响。方法采用PCR技术扩增出TRAF1编码基因,将其构到真核表达载体pFlag-CMV-2上。用脂质体将构建的真核表达载体瞬时转染HEK293细胞,用Western blot检测TRAF1蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因实验验证其对NF-κB转录活性的影响。结果成功克隆TRAF1编码基因至相应表达载体上。构建的TRAF1真核表达载体使HEK293细胞高表达TRAF1蛋白;在肿瘤坏死因子(TNF-α)的刺激下可以抑制NF-κB的转录活性。结论TRAF1负调控NF-κB的活性,为进一步研究TRAF1的功能提供了线索。