基金项目: 国家自然科学基金(编号:31860275)
作者:任晓洁;贾冰涵;李金钊;罗慧娟;李瑗;李军平;
关键词:结肠平滑肌细胞;;μ阿片受体;;内吗啡肽2
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.05.012
〔摘 要〕 目的通过培养大鼠结肠原代平滑肌细胞,探索μ阿片受体(MOR)在结肠平滑肌细胞中的表达特性。方法分离、培养和鉴定结肠平滑肌细胞;运用免疫荧光组织化学双重标记法观察MOR、内吗啡肽2(EM2)、钙调蛋白(CaM)在结肠平滑肌细胞的分布特性;施加乙酰胆碱(ACh)(1×10-3mol/L)或EM2(2μmol/L)后,Western blot技术检测CaM蛋白表达变化;单独或依次施加ACh(1×10-3mol/L)和EM2(2μmol/L)后,钙离子成像法观察平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果鉴定结肠平滑肌细胞:α-肌动蛋白(α-SMA)标记的阳性细胞占细胞总数的95%以上;免疫荧光组织化学双重标记显示,在结肠平滑肌细胞有MOR和EM2的分布,且所有MOR和EM2阳性细胞均与α-SMA有共存;Western blot检测发现,施加ACh 10 min后,CaM表达升高(P<0.05);施加EM2 10 min后,CaM表达降低(P<0.05);钙离子成像结果显示,单独施加ACh,平滑肌细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05);单独施加EM2,结肠平滑肌细胞内钙离子浓度下调(P<0.05),依次施加ACh和EM2后,EM2显著抑制了ACh诱发的钙离子浓度升高(P<0.05)。结论MOR和EM2在结肠平滑肌细胞有表达,且EM2可通过MOR抑制CaM的表达与降低钙离子浓度。