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酵母双杂交技术筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白

安徽医科大学学报 2007 02 154-157     字体:

基金项目: 安徽省教育厅自然科学基金项目(编号:2003kj189);; 安徽医科大学博士科研基金项目

作者:高雪敏;刘晓颖;张庆慧;戴寒晶;范礼斌;

关键词:酵母菌;;双杂交系统技术

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2007.02.010

〔摘 要〕 目的筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白,进一步探讨PALS1的功能及其分子机制。方法将PALS1的全长cDNA序列克隆到载体pGBKT7中,重组的pGBKT7-PALS1质粒转入酵母AH109细胞,细胞置于SD/-Trp培养基上生长,阳性细胞再用Hela细胞的cDNA文库质粒转化,生长于SD/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal,显蓝色的克隆为阳性。阳性克隆细胞中的DNA被抽提后转化细菌细胞,然后抽提DNA进行酶切分型。合适的类型测序后进行BLAST检索分析。结果筛选到了13个阳性克隆,其中有2个是已知蛋白的基因即ATRAP和GLT28D1。结论利用酵母双杂交系统成功克隆了PALS1的结合蛋白的基因,为进一步研究PALS1蛋白的功能提供了有益的启示。