安徽医科大学学报
2006 05 491-493
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基金项目: 安徽省自然科学基金资助(编号:050430604)
作者:罗欣;徐从贞;方敏;张胜权;
关键词:白细胞介素15/遗传学;;大肠杆菌/遗传学;;基因表达;;重组融合蛋白质类
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.05.002
〔摘 要〕 目的克隆人白细胞介素(IL)15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a(+)中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS-PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16·1ku,与理论值相符。结论获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。