基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:30472050);; 上海市科技攻关项目(编号:05dz19317);; 安徽省自然科学基金资助项目(编号:050430706)
作者:温宗梅;潘卫;张玉侠;周波;潘欣;陈秋莉;周霞;贾建安;蒋少华;邓松华;
关键词:细菌噬菌体/遗传学
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.04.001
〔摘 要〕 目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。