安徽医科大学学报
2005 01 16-19
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基金项目: 安徽省自然科学基金资助项目(编号: 03043707)
作者:周正春,陈兵,张胜权,罗欣,徐从贞,汪思应,葛建军
关键词:血管内皮生长因子类;;克隆,分子;;逆转录聚合酶链反应;;基因表达
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2005.01.006
〔摘 要〕 目的 克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段,构建pcDNA3·1 /hVEGF165,观察其在COS 7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病奠定基础。方法 从胎儿心肌组织中提取总RNA,应用RT PCR方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,PCR法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3 1 /myc his B中,构建pcDNA3 1 /hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS 7细胞,WesternBlotting方法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果 RT PCR方法从胎儿心肌组织获得正确的hVEGF165基因序列,成功构建pcDNA3·1 /hVEGF165且实现转染COS 7细胞的瞬时表达。结论 该实验构建的pcDNA3· 1 /hVEGF165转染真核细胞COS 7能够表达rhVEGF蛋白。