安徽医科大学学报
2004 06 432-435
字体:大 中 小
基金项目: 安徽省 2 0 0 1年度优秀青年科技基金 (编号 :2 0 0 1 2 5 )
作者:汪飞鹏,桂向东,宋礼华
关键词:超氧化物歧化酶;;聚合酶链反应;;大肠杆菌
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2004.06.007
〔摘 要〕 目的 构建人hCu ,Zn SOD TATPTD表达载体及其原核表达与表达产物的纯化。方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入 pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3′引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入pUC19。将SOD TATPTD融合基因克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH 5α。温度诱导表达 ,表达产物用离子交换层析法初步纯化。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定表明所构建质粒与设计相同 ,hCu ,Zn SOD TATPTD融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因的表达产物 ,为进一步研究及临床应用奠定了基础。