安徽医科大学学报
2023 02 v.58 208-213
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基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号：81973314、81973332);;安徽省杰出青年科学基金(编号：1808085J28);;安徽高校协同创新项目(编号：GXXT-2020-066);;2021年安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助项目(编号：gxbjZD2021047)
作者：朱振铎;苏甜甜;程慧娟;江春如;方茹红;管秋韵;何凤;葛明丽;魏伟;汪庆童;
关键词：磷酸二酯酶4D;;CRISPR/Cas9;;基因敲除;;基因型鉴定
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.02.006
〔摘 要〕 目的 应用CRISPR/Cas9技术构建磷酸二酯酶4D(PDE4D)纯合子敲除小鼠，为深入探究PDE4D基因的功能及作用机制提供基础。方法 针对PDE4D基因外显子4,5号构建载体显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵中，经过母本繁育和子代交配获得PDE4D~(-/-)小鼠，通过PCR产物测序及基因型鉴定技术测定小鼠基因型。使用超声成像系统和HE染色检测小鼠主要器官形态和功能的变化，通过Westernblot实验验证PDE4D蛋白在小鼠体内的表达情况。结果 PDE4D~(-/-)小鼠基因型稳定遗传，小鼠体型较小，体内主要器官无明显形态及组织学改变。PDE4D杂合或纯合敲除小鼠主要组织中PDE4D表达减少或基本不表达，敲除效果较好。结论本课题利用CRISPR/Cas9技术成功建立了PDE4D~(-/-)小鼠，未发现明显生理异常，可用于以PDE4D为靶点的疾病发病机制及药物研究。