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人内皮细胞特异性分子-1表达载体的构建、体外表达及初步纯化

安徽医科大学学报 2002 06 415-419+414     字体:

基金项目: 国家自然科学基金 ( 39870 32 4);; 安徽省自然科学基金( 0 10 43716和 990 44312 );; 安徽省教育厅自然科学基金;; 安徽省高校省学术和技术带头人后备人选科学研究基金资助

作者:张素梅,王雪,胡若磊,朱华庆,熊江霞,周青,桂淑玉,汪渊

关键词:聚合酶链反应

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.06.002

〔摘 要〕 目的 探讨人内皮细胞特异性分子 1(hESM 1)表达载体的构建、体外表达及表达产物的初步纯化。方法 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,用反转录 PCR扩增出hESM 1的cDNA。插入质粒 pET 2 8b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL 2 1,经IPTG诱导表达 ,表达产物用电洗脱的方法初步纯化。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为含hESM 1的重组质粒 ,经SDS PAGE分析证实获得产物为分子量 2 3 80 8u的融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 4%。结论 成功构建了重组hESM 1表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究及临床应用奠定了良好基础。