安徽医科大学学报
2002 01 22-25
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基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (编号 :30 0 0 76 1748)
作者：郭丽,王健伟,史百芬,黄升海,赵玉琪,洪涛
关键词：基因,vpr;;甲胎蛋白类;;基因表达;;遗传载体
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.01.008
〔摘 要〕 目的 构建可在肝癌细胞中特异性表达人HIV 1vpr基因的重组表达载体。方法 用PCR的方法从 pBSX CYPYVPR xcTHY(简称vpr质粒 )中扩增HIV 1vpr基因片段 ,克隆到pGEM T载体中 ,构建克隆载体 pGEM T/vpr,切下vpr片段后插入到 pCI质粒中 polyA的上游 ,构建中间载体pCI/vpr ,再切下vprA(vpr+polyA)插入到pAF5 .1中AFP启动子的下游 ,从而把AFP启动子和polyA尾分别克隆到vpr基因的上游和下游 ,构建成 pAFVPRA载体。 结果 成功构建了带有AFP启动子和polyA尾的载体 pAFVPRA。结论 pAFVPRA质粒构建成功后 ,可进一步通过合适的方式把HIV 1vpr基因导入肝细胞 ,以探讨vpr基因对原发性肝癌细胞的杀伤作用