安徽医科大学学报
2022 10 v.57 1518-1522
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基金项目: 安徽省自然科学基金项目(编号：11040606M170);;安徽医科大学双肩挑干部学术恢复科研专项(编号：0112011109)
作者：李彩红;朱亮亮;王蓓华;周恒;李强;朱昉修;范礼斌;
关键词：RACK1;;CLIC1;;相互作用
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.10.002
〔摘 要〕 目的 探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)与活化蛋白激酶C受体1(RACK1)在细胞内的相互作用。方法 构建重组质粒pcDNA3.1-RACK1-HA,转染质粒pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到HEK 293T细胞中，转染pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到COS7中。GST-pulldown和免疫共沉淀实验确定CLIC1和RACK1在体内及体外的相互作用。间接免疫荧光实验检测RACK1与CLIC1在细胞中的定位。结果 成功构建pcDNA3.1-RACK1-HA,Western blot检测结果证明了RACK1和CLIC1可在HEK 293T细胞中表达，GST-pulldown结果显示RACK1与CLIC1在体外可直接结合，免疫共沉淀结果显示RACK1和CLIC1可在细胞内结合。间接免疫荧光实验表明RACK1与CLIC1可共定位于细胞质。结论 RACK1与CLIC1可在细胞中结合。