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弓形虫14-3-3信号转导蛋白基因亚克隆及鉴定

安徽医科大学学报 2001 01 12-14     字体:

基金项目: 安徽医科大学青年科研基金资助项目! (编号 5 2 2 0 45 )

作者:王维,汪学龙,沈继龙,蒋作君

关键词:弓形虫属;;基因表达;;克隆,分子;;信号转递

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2001.01.004

〔摘 要〕 目的 将弓形虫 14 3 3(Toxo14 3 3)信号转导蛋白基因亚克隆入表达载体pBK CMV ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子以及寄生虫 宿主相互作用等研究。方法 根据Toxo14 3 3核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以弓形虫速殖子mRNA为模板 ,RT PCR法扩增Toxo14 3 3DNA片段 ,通过TA连接将其克隆入 pGEM T载体、经测序证实序列完全正确。再将该目的基因亚克隆入表达载体 pBK CMV中 ,转化大肠杆菌XL1 blue,提取质粒 ,经双酶切法和以该质粒为模板PCR法证实。结果 Toxo14 3 3信号蛋白基因ORF含 798bp ,编码 2 6 5个氨基酸。 结论 获得表达质粒pBK CMV/Toxo14 3 3阳性重组体 ,为原核和真核基因表达奠定了基础。