基金项目: 国家自然科学基金项目(编号3200679);安徽省高校自然科学重点项目(编号2022AH051131);
作者:余苑苑;刘诗涵;许柱;杜瀛瀛
关键词:癌症;肝细胞癌;DNA损伤;核苷酸切除修复;RBM39;ERCC1;
DOI:
〔摘 要〕 目的 探讨肝细胞癌(HCC)中核苷酸切除修复(NER)的调控机制。方法 根据NER通路中基因的表达水平,使用TCGA数据库对HCC进行分子分型。通过siRNA构建RNA结合基序蛋白39(RBM39)基因敲低的HCC细胞株,通过RBM39质粒构建RBM39过表达的HCC细胞株,使用诱导RBM39蛋白降解的试剂Indisulam处理细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot分别检测RBM39、核苷酸切除修复交叉互补组1 (ERCC1)的mRNA和蛋白表达水平的变化;流式细胞术检测NER效率;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力。结果 HCC患者根据NER活性可以分为C1、C2和C3三型,其中C3分型中NER活性最高(P <0.000 1)。转染RBM39 siRNA或Indisulam处理组NER修复效率较对照组下降(P <0.01),细胞存活率降低(P <0.01),并且ERCC1的mRNA和蛋白表达降低(P <0.01);RBM39过表达组ERCC1的mRNA和蛋白表达较对照组增强(P <0.01)。结论HCC细胞中RBM39可能通过调控ERCC1的表达影响NER修复效率。