〔摘　要〕 目的 二氯化钴(CoCl₂)体外诱导大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）上皮-间充质转化（EMT）细胞模型的建立方法。方法 体外培养NRK-52E细胞，随机分为空白对照组（NC组）和 CoCl₂处理组。CoCl₂处理组分别进行1、2、3、4个循环的处理，每个循环包括CoCl₂处理9 h后于无CoCl₂培养基中恢复3 h。采用CCK-8法筛选CoCl₂诱导EMT的最佳浓度和时间；通过光学显微镜和鬼笔环肽染色观察细胞形态学变化；采用Western blot和免疫荧光法检测EMT标志蛋白的表达水平。结果 与NC组相比，100 μmol/L CoCl₂刺激48 h显著诱导细胞凋亡（P<0.01），符合后续实验要求。蛋白免疫印迹结果显示，100 μmol/L CoCl₂处理NRK-52E细胞9 h后，于无 CoCl₂培养基中恢复3 h，重复3个循环，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达升高（P<0.001），表明细胞纤维化反应最为明显。通过光学显微镜和罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察，100 μmol/L CoCl₂处理NRK-52E细胞9 h后，于无CoCl₂培养基中恢复3 h，重复3个循环，NRK-52E细胞的形态学变化和细胞骨架重排最为显著，模型稳定性最佳。免疫荧光检测结果显示，与NC组相比，100 μmol/L CoCl₂处理NRK-52E细胞9 h后，于无 CoCl₂培养基中恢复3 h，重复3个循环组中，纤维基质蛋白Collagen I的荧光强度增加（P<0.001）。结论 100 μmol/L CoCl₂处理NRK-52E细胞9 h后于无CoCl₂培养基中恢复3 h，重复3个循环，可成功建立体外EMT细胞模型。