〔摘　要〕 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建50序列相似的家庭成员A(FAM50A)基因敲除的小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞系Beta-TC-6,并制备特异性识别FAM50A的多克隆抗体。方法 设计2条靶向FAM50A基因的向导RNA(sgRNA),然后构建表达亮蓝荧光蛋白(BFP)的重组质粒用于基因敲除。将构建成功的重组质粒转染入Beta-TC-6细胞,并筛选出BFP阳性单细胞进行克隆扩增。对扩增后的单克隆细胞采用Sanger测序进行基因型鉴定,并使用Western blot检测FAM50A蛋白的表达。将纯化的人源FAM50A重组蛋白免疫新西兰兔以制备多克隆抗体,并利用已构建的基因敲除细胞系验证其特异性。结果成功筛选并鉴定出1株FAM50A基因敲除的单克隆细胞系,Sanger测序证实其靶向位点存在碱基缺失。Western blot检测结果显示,该细胞系中无FAM50A蛋白表达。所制备的多克隆抗体能够识别野生型Beta-TC-6细胞中的鼠源FAM50A蛋白及hTERT-RPE1细胞中过表达的人源FAM50A-GFP融合蛋白,但在FAM50A敲除细胞中未检测到信号。结论 成功建立了FAM50...