基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:9021548201)
作者:李茜;李心怡;李小静;朱晓璇;丁以春;
关键词:慢病毒;;富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白;;瘢痕疙瘩;;成纤维细胞;;转化生长因子-β
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.06.018
〔摘 要〕 目的 观察慢病毒介导的SPARC基因沉默对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响并初步探讨其影响机制。方法将携带SPARC shRNA的慢病毒载体(LV2N-shRNA-SPARC,sh-SPARC组)及空载体(LV2-NC,sh-NC组)转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF),以未作任何处理的成纤维细胞为空白对照组,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测SPARC mRNA和蛋白的表达。四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞的增殖情况;流式细胞仪法测定HKF细胞周期及细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中TGF-β1及TβRⅠ的表达。结果(1) SPARC-shRNA慢病毒载体感染HKF后,sh-SPARC组细胞中SPARC mRNA和蛋白表达量明显低于sh-NC组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2) MTT结果显示,与对照组相比,sh-SPARC组细胞增殖减慢(P<0.05);(3)流式细胞术结果显示,sh-SPARC组成纤维细胞进入S期的比例低于sh-NC组和空白对照组(P<0.05);细胞凋亡率较对照组增加(P<0.05);(4) Western blot结果显示,sh-SPARC组TGF-β1及TβRⅠ的蛋白表达水平明显降低。结论SPARC基因沉默能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,阻滞细胞周期进程,促进凋亡,其机制可能与TGF-β信号通路的下调有关。