〔摘　要〕 目的 构建屎肠球菌（Ef）介导的铜绿假单胞菌（Pa）重组Ef-PA0057疫苗，研究其诱导的肺荷菌量保护力及体液免疫应答。方法 将PA01株ATCC9027的基因组DNA作为模板进行PCR克隆PA0057基因，将克隆基因插入表达质粒pGEX-1λT得pGEX-PA0057；将重组质粒电穿孔Ef TX0016株，构建rEf-PA0057疫苗；双酶切和PCR鉴定的抽提质粒经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blot分析和鉴定表达产物；用5×10～8克隆形成单位（CFU）的rEf-PA0057疫苗灌胃小鼠，每周3次，连续3周；在初次接种后4周，取5×10～7 CFU的PA01株进行滴鼻攻击，在攻击后2周杀鼠，分离肺脏，培养肺细菌并行菌落计数；分别于初次免疫后第0、4、6周采静脉血，分离血清，ELISA测定IgG及其亚类和IgE。结果 PCR克隆出900 bp的PA0057基因；双酶切证实PA0057基因插入pGEX-1λT中；PCR显示，rEf-PA0057疫苗构建成功；经SDS-PAGE证实，重组菌表达58 ku的PA0057-GST融合蛋白，目标蛋白的含量是菌体总蛋白的18%；通过Western blot提示，融合蛋白可与Pa感染的鼠阳性血清发生结合反应；rEf-PA0057疫苗组、空载体组和Ef对照组肺组织的菌落数分别为（0.297±0.011）×10～8 CFU、（7.576±0.206）×10～8 CFU和（7.551±0.185）×10～8 CFU，差异有统计学意义（P<0.01）；疫苗组的血清抗体IgG、IgG1、IgG2b、IgG3和IgE在初次免疫后4周均升高，在攻击后2周达较高水平（P<0.01）；同一时间点比较，疫苗组的血清抗体与空载体组或Ef对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）。结论 成功构建了rEf-PA0057疫苗，该疫苗接种后产生的一个体液免疫反应可对抗铜绿假单胞菌PA01株的滴鼻攻击。