基金项目: 安徽省高校自然科学研究项目(编号:2023AH040376);
作者:尤峻柏;汪先晨;凌辉;范家好;陈齐;陶辉;沙纪名
关键词:RUNX3;肺成纤维细胞;FAP;细胞增殖;细胞迁移;肺纤维化;
DOI:专辑:医药卫生科技
〔摘 要〕 目的探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的小鼠肺原代成纤维细胞(PFs)活化中的作用,以及其对成纤维细胞激活蛋白(FAP)表达、细胞增殖与胶原合成的影响。方法从C57BL/6小鼠中分离并培养PFs,利用小干扰RNA(siRNA)技术构建RUNX3基因沉默模型,并将细胞分为空白对照组(Control组)、TGF-β1组(TGF-β1组)、阴性对照组(TGF-β1+siRNA-NC组)及RUNX3沉默组(TGF-β1+si-RUNX3组),并在TGF-β1刺激基础上进行RUNX3过表达回复实验。采用蛋白质印迹(Westernblot)和实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测RUNX3、FAP及Ⅰ型胶原(COL1A1)的表达;以CCK-8和EdU评估细胞增殖;免疫荧光双标观察COL1A1与FAP的表达。结果与Control组相比,TGF-β1组PFs中RUNX3、FAP及COL1A1的表达上调(P<0.01)。CCK-8实验显示,与阴性对照组比较,RUNX3沉默组吸光度值下降(P <0.01);EdU实验显示,与阴性对照组比较,RUNX3沉默组的EdU阳性细胞率降低(P <0.01)。免疫荧光双标染色显示,与阴性对照组比较,RUNX3沉默组COL1A1与FAP的荧光强度减弱;在RUNX3过表达回复实验中,上述荧光信号出现回升(P <0.01)。结论RUNX3在TGF-β1诱导下刺激PFs细胞活化,可能通过正向调控FAP表达促进细胞增殖与胶原合成。靶向干预RUNX3/FAP轴为肺纤维化治疗提供潜在策略。