基金项目: 湖南省临床医疗技术创新引导计划(编号:2018SK51508)
作者:曾健;蒋斌;黄果;陈娟;
关键词:乳腺癌;;胶原三螺旋重复蛋白1;;p53;;线粒体;;细胞凋亡
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.12.004
〔摘 要〕 目的探究短发夹RNA(shRNA)干扰载体沉默胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法将shRNA-CTHRC1质粒和阴性对照质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,采用qPCR法和Western blot法分别检测CTHRC1 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法和流式细胞术法分别检测细胞增殖活力和凋亡率;线粒体膜电位试剂盒(JC-10染色法)检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase 3、细胞色素C(Cyt C)以及p53介导的线粒体凋亡途径相关蛋白p53、Apaf-1、Cleaved-caspase 9、Bcl-2、Bax和PUMA等表达水平。将shRNA-CTHRC1质粒和si-p53干扰质粒分别或同时转染至MCF-7细胞中,Western blot法检测p53和Cyt C蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果沉默CTHRC1可降低MCF-7细胞中CTHRC1 mRNA和蛋白表达水平,抑制细胞增殖活力,提高细胞凋亡率,降低线粒体膜电位,上调Cleaved-caspase 3、p53、Apaf-1、Cleaved-caspase 9、Bax、PUMA和胞质中Cyt C等蛋白表达水平,下调Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平。然而,干扰p53表达可逆转CTHRC1沉默对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论 CTHRC1沉默通过激活p53介导的线粒体凋亡途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。