基金项目: 江苏省青年医学重点人才基金项目(编号:QNRC2016883)
作者:盛瑛;张宸铭;陈亮;徐佰达;靳天慧;刘叶红;叶挺;宗刚军;
关键词:生长分化因子11;;血管钙化;;人主动脉内皮细胞
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.11.009
〔摘 要〕 目的建立体外人主动脉内皮细胞(HAEC)钙化模型,探讨外源生长分化因子11(GDF11)对钙化的影响。方法使用低浓度(10 mmol/L)/高浓度(30 mmol/L)β-甘油磷酸+100 nmol/L地塞米松+50μg/ml L-抗坏血酸刺激HAEC,筛选出有效钙化诱导方案;使用不同浓度GDF11(0、30、50、100 ng/ml)刺激HAEC不同时间(0、8、24、48 h),筛选出GDF11有效作用浓度与时间;将HAEC分为空白组、GDF11组、钙化组、GDF11+钙化组。采用Western blot检测骨形态发生蛋白(BMP)2、BMP4、GDF11的表达;细胞免疫荧光检测GDF11的表达;RT-PCR检测成骨细胞特异转录因子(Runx2)、Runx2下游基因Osterix及GDF11的基因表达;茜素红S染色检测钙化沉积。结果(1)高浓度组的GDF11、BMP4、BMP2蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05);高浓度组的Runx2、Osterix、GDF11基因表达水平均高于空白对照组(P<0.05);茜素红染色显示,高浓度组钙盐沉积较空白对照组增加;(2) 100 ng/ml GDF11预处理24 h后, BMP2、BMP4蛋白表达较钙化组下降(P<0.05);(3)与钙化组比较,GDF11+钙化组BMP2、BMP4蛋白表达下降(P<0.05),GDF11组与空白组比较差异无统计学意义;与钙化组比较,GDF11+钙化组的钙化沉积减少, GDF11组与空白组比较差异无统计学意义;GDF11+钙化组Runx2、Osterix基因水平均低于钙化组(P<0.05),但GDF11组与空白组比较差异无统计学意义。结论外源GDF11可抑制HAEC钙化,可能与抑制HAEC成骨分化有关。