〔摘　要〕 目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株，研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则，设计并合成3对TRAF2-shRNA干扰序列，通过PCR对引物进行退火，通过双酶切PLKO.1-puro获得线性载体，将线性化载体与退火后引物通过Solution I连接，连接产物导入感受态细胞，涂板，挑取阳性菌落进行测序。构建3种不同的PLKO.1-TRAF2-shRNA慢病毒重组质粒，借助慢病毒包装质粒对对数生长期的HEK 293T细胞进行慢病毒包装，收集病毒液感染MH7A细胞，同时使用嘌呤霉素对TRAF2低表达的MH7A稳转株进行筛选。使用CCK-8法、Western blot、qPCR检测MH7A中肿瘤坏死因子TNF-α诱导TRAF2低表达的MH7A增殖功能及下游信号TRAF2、P65蛋白表达和mRNA水平。结果 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1)、PLKO.1-TRAF2-shRNA(2)和PLKO.1-TRAF2-shRNA(3)慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro,将3个TRAF2-shRNA慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro分别与慢病毒包装质粒导入HEK 293T获得病毒液，将病毒液感染MH7A细胞后，经嘌呤霉素(2.00μg/ml)筛选，2 d得到MH7A稳转株；qPCR和Western blot结果显示，PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株中TRAF2 mRNA和蛋白的表达较阴性对照组明显下降；CCK-8和Western blot结果表明，MH7A中TRAF2敲低后，TNF-α诱导的TRAF2低表达的MH7A细胞增殖和P65的磷酸化水平明显下降。结论 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株，研究TNF-α-TRAF2信号活化介导RA滑膜细胞异常增殖中的作用。