基金项目: 国家自然科学基金(编号:81130031)
作者:尹雪莉;张胜权;张学军;
关键词:IL28RA;;基因重组;;HaCaT;;迁移
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.11.023
〔摘 要〕 目的构建白介素28受体ɑ(IL28RA)基因的真核表达载体,并转染HaCaT细胞,观察该基因对HaCaT细胞迁移能力的影响。方法从HepG2细胞中提取总RNA,逆转录后以其cDNA为模板PCR扩增IL28RA编码片段。将其插入质粒pCMV6构建pCMV6-IL28RA重组表达体;重组体经酶切分析及测序鉴定,将其转染至HaCaT细胞中,经G418筛选出稳定过表达IL28RA细胞株。为检测转染效率,反转录实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)分析转染细胞中IL28RA mRNA相对表达水平。伤口愈合实验检测过表达IL28RA对HaCaT细胞迁移能力的影响。结果 IL28RA基因成功构建并在HaCaT中表达,RT-qPCR检测转染效率显示与对照细胞相比,过表达细胞中IL28RA mRNA相对表达水平显著升高。细胞伤口愈合实验检测显示与对照细胞相比,IL28RA过表达抑制HaCaT细胞迁移能力。结论 IL28RA基因过表达降低HaCaT细胞迁移能力。